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procédé selon la revendication 11, dans lequel l'enzyme de restriction de classe iis est choisie dans le groupe constitué de acc b71, a ce iii, acl wi, a de i, a hd i, a lw 261, a lw i, a lw ni, a pa bi, a sp ei, asp i, a su hpi, bbs i, bbv i, bbv ii , bce 831, bce fi, bci vi, bf ii, bgl i, bin i , brm i, bpi i , bpm i, bpu ai, bsa i, bse 3di, bse 4i , bse gi, bse li, bse ri, bsg i , bsl i , bsm ai, bsm bi, bsm fi, bsp mi , bsr di , bst 71i, bst api, bst f5i, bst xi, bsu 6i, dra iii , drd i , dse di, eam 1104i, eam 1105i, ear i , ech hki, eco 31i, eco 57i, eco ni, esp 1396i, esp 3i, fok i , fau i , gsu i, hga i , hph i , mbo ii, msi yi, mwo i, nru gi, pfi mi, pfl fi, pl ei, sfa ni, tsp ri , ksp 632i , mme i, rle ai, sap i, sfi i , taq ii , tth 111i, tth 111ii, van 91i , xag i et xcm i. procédé selon la revendication 1, dans lequel les vecteurs d'expression sont clivés pour produire des extrémités non palindromiques, en utilisant une enzyme choisie dans le groupe constitué de ava i, ama 87i, bco i, bso bi , eco 88i, ava ii, eco 47i, bme 18i, hgi ei, sin i, ban i , acc b1i, bsh ni, eco 64i, bfm i, bst sfi, sfc i, bpu 10i , bsa mi , bsc ci , bsm i, mva 1269i, bsh 1285i, bsa oi, bsi ei, bst mci, bse 1i, bse ni , bsr i, cfr 10i, bsi i , bss si , bst 2bi, bsi zi, asp s9i, cfr 13i, sau 96i, bsp 1720i, blp i, bpu 1102i, cel ii, bst 4ci, bst dei, dde i, cpo i, csp i, rsr ii, dsa i, bst dsi, eco 24i, ban ii, eco t38i, fri oi , hgi jii , eco 130i, sty i, bss t1i, eco t14i, erh i , esp i , blp i , bpu 1102i, bsp 1720i, cel ii, hgi ai, bsi hkai, alw 21i, asp hi, bbv 12i, hin fi, psp ppi, ppu mi, psp 5ii, san di , sdu i, bsp 1286i, bmy i , sec i, bsa ji, bse di, sfc i, bfmi, bst sfi et sml i. procédé pour produire une cellule hôte eucaryote recombinante qui exprime un peptide ou un polypeptide d'intérêt dans une cellule hôte eucaryote, de sorte que le polymère d'acide nucléique ne soit pas propagé dans une cellule bactérienne ou dans une autre cellule hôte intermédiaire avant introduction dans ladite cellule eucaryote, comprenant les étapes consistant à : (a) cliver au moins deux vecteurs d'expression pour produire des extrémités non palindromiques ou palindromiques, les vecteurs d'expression clivés dotés d'extrémités palindromiques étant ensuite traités pour produire des extrémités non palindromiques, et les vecteurs d'expression comprenant une cassette d'expression qui comprend un gène d'intérêt et un gène de marqueur sélectionnable ; (b) ajouter des oligonucléotides de poison, pendant l'étape de ligature (c), aux vecteurs d'expression clivés dotés d'extrémités non palindromiques, les oligonucléotides de poison ayant une séquence nucléotidique qui est complémentaire des extrémités non palindromiques des vecteurs d'expression clivés, laquelle séquence complémentaire permettant aux oligonucléotides de poison de se lier aux extrémités non palindromiques des vecteurs d'expression clivés ou aux extrémités non palindromiques des vecteurs d'expression ligaturés ensemble et, une fois ainsi lié, un oligonucléotide de poison inhibant l'élongation du polymère d'acide nucléique ; et (c) ligaturer les vecteurs d'expression clivés dotés d'extrémités non palindromiques pour produire des polymères d'acide nucléique ; (d) introduire les polymères d'acide nucléique dans une cellule hôte eucaryote; (e) cultiver la cellule hôte eucaryote recombinante qui produit le peptide ou le polypeptide d'intérêt.

Английский

the method of claim 1, wherein the expression vectors are cleaved to produce non-palindromic ends, using an enzyme selected from the group consisting of aval, ama 87i, bco i, bso bi, eco 88i, ava ii, eco 47i, bme 18i, hgi ei , sin i , ban i , acc b1i, bsh nl, eco 64i, bfm i, bst sfi, sfc i , bpu 10i, bsa mi, bsc ci, bsm i, mva 1269i, bsh 1285i, bsa oi, bsi ei, bst mci, bse 1i, bse ni, bsr i, cfr 10i, bsi i, bss si, b st 2bi, bsi zi , asp s9i , cfr 13i , sau 96i, bsp 1720i , blp i, bpu 1102i , ce /ii , bst4 ci , b st dei, dde i , cpo i, csp i , r sr ii, dsa i, b st dsi, eco 24i, b an ii, eco t38i, fri oi , h gi jii, eco 130i, sty i , bss t1i, eco t14i, erh i , esp i, blp i, bpu 1102i, bsp 1720i, cel ii, hgi ai , bsi hkai, alw 21i, asp hi, bbv 12i, hin ft , psp ppi, ppu mi , psp 5ii , san di , sdu i , bsp 1286i , bmy i, sec i, bsa ji, bse di , sfc i, bfm i , bst sfi, and sml i . a method for producing a recombinant eukaryotic host cell that expresses a peptide or polypeptide of interest in a eukaryotic host cell, such that the nucleic acid polymer is not propagated in a bacterial or other intermediate host cell before introduction into said eukaryotic cell, comprising: (a) cleaving at least two expression vectors to produce either non-palindromic ends or palindromic ends, wherein cleaved expression vectors with palindromic ends are further treated to produce non-palindromic ends, and wherein the expression vector comprises an expression cassette that comprises a gene of interest and a selectable marker gene; (b) adding poison oligonucleotides, during ligation step (c), to the cleaved expression vectors having non-palindromic ends, wherein the poison oligonucleotides have a nucleotide sequence that is complementary to the non-palindromic ends of the cleaved expression vectors which complementary sequence allows the poison oligonucleotides to bind to the non-palindromic ends of the cleaved expression vectors or to the non-palindromic ends of expression vectors ligated together and, when so bound, a poison oligonucleotide inhibits elongation of the nucleic acid polymer; and (c) ligating the cleaved expression vectors with non-palindromic ends to produce nucleic acid polymers; (d) introducing the nucleic acid polymers into a eukaryotic host cell, and (e) culturing the recombinant eukaryotic host cell, which produces the peptide or polypeptide of interest.

Последнее обновление: 2014-12-04
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