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Deutsch

Eine für einen Protease-Biosensor kodierende, rekombinante Nukleinsäure, umfassend: a. eine erste Nukleinsäuresequenz, die für mindestens ein detektierbares Polypeptidsignal kodiert; b. eine zweite Nukleinsäuresequenz, die für mindestens eine Proteaseerkennungsstelle kodiert, wobei die zweite Nukleinsäuresequenz mit der ersten Nukleinsäuresequenz, die für mindestens ein detektierbares Polypeptidsignal kodiert, operativ verknüpft ist; und c. eine dritte Nukleinsäuresequenz, die für mindestens eine Reaktanten-Zielsequenz, d. h. eine Aminosäuresequenz, welche die zelluläre Verteilung des Reaktanten auf eine bestimmte subzelluläre Domäne der Zelle beschränkt, kodiert, wobei die dritte Nukleinsäuresequenz mit der zweiten Nukleinsäuresequenz , die für mindestens eine Proteaseerkennungsstelle kodiert, operativ verknüpft ist.

Französisch

Acide nucléique recombinant codant pour un biocapteur de protéase, comprenant: a. une première séquence d'acide nucléique qui code pour au moins un signal polypeptidique détectable; b. une deuxième séquence d'acide nucléique qui code pour au moins un site de reconnaissance de protéase, tandis que la deuxième séquence d'acide nucléique est liée opérationnellement à la première séquence d'acide nucléique qui code pour le au moins un signal polypeptidique détectable; et c. une troisième séquence d'acide nucléique qui code pour au moins une séquence cible de réactif, c'est-à-dire une séquence d'acides aminés qui confère une restriction sur la distribution cellulaire du réactif pour un domaine subcellulaire particulier de la cellule, tandis que la troisième séquence d'acide nucléique est liée opérationnellement à la deuxième séquence d'acide nucléique qui code pour le au moins un site de reconnaissance de protéase.

Letzte Aktualisierung: 2014-12-03
Nutzungshäufigkeit: 1
Qualität:

Deutsch

Protease-Biosensor nach Anspruch 10, wobei die zweite Domäne, die eine Proteaseerkennungsstelle umfasst, eine Sequenz umfasst, die ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NOS: 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120 und 122.

Französisch

Biocapteur de protéase selon la revendication 10, dans lequel le deuxième domaine comprenant un site de reconnaissance de protéase comprend une séquence choisie dans le groupe consistant en SEQ ID NOS: 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120 et 122.

Letzte Aktualisierung: 2014-12-03
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Qualität:

Deutsch

Rekombinanter Nukleinsäure-Biosensor nach Anspruch 1, wobei die zweite Nukleinsäuresequenz, die für eine Proteaseerkennungsstelle kodiert, eine Sequenz, ausgewählt aus der Gruppe betsehend aus SEQ ID NOS: 53, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109, 111, 113, 115, 117, 119 und 121, umfasst.

Französisch

Biocapteur à base d'acide nucléique recombinant selon la revendication 1, dans lequel le deuxième acide nucléique codant pour un site de reconnaissance de protéase comprend une séquence choisie dans le groupe consistant en SEQ ID NOS: 53, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109, 111, 113, 115, 117, 119 et 121.

Letzte Aktualisierung: 2014-12-03
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Qualität:

Deutsch

Rekombinanter Protease-Biosensor, umfassend: a. eine erste Domäne, umfassend mindestens ein detektierbares Polypeptidsignal; b. eine zweite Domäne, umfassend mindestens eine Proteaseerkennungsstelle; und c. eine dritte Domäne, umfassend mindestens eine Reaktanten-Zielsequenz; wobei die erste Domäne und die dritte Domäne voneinander durch die zweite Domäne getrennt sind.

Französisch

Biocapteur de protéase recombinante comprenant a. un premier domaine comprenant au moins un signal polypeptidique détectable; b. un deuxième domaine comprenant au moins un site de reconnaissance de protéase; et c. un troisième domaine comprenant au moins une séquence cible de réactif; tandis que le premier domaine et le troisième domaine sont séparés par le deuxième domaine.

Letzte Aktualisierung: 2014-12-03
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Deutsch

Verfahren nach Anspruch 30, dadurch gekennzeichnet, daß Passagierproteine oder Teile davon durch eine intrinsische Protease der Wirtszelle, insbesondere die OmpT-Protease, die OmpK-Protease oder die Protease X, freigesetzt werden. Verfahren nach Anspruch 31, dadurch gekennzeichnet, daß Passagierproteine oder Teile davon durch eine extern zugeführte Protease, insbesondere die IgA-Protease, Thrombin oder Faktor X, freigesetzt werden. Rekombinanter Vektor auf dem in operativer Verknüpfung mit einem Promotor eine fusionierte Nukleinsäuresequenz lokalisiert ist, umfassend: (i) einen Signalpeptid-kodierenden Nukleinsäureabschnitt, (ii) einen für das zu präsentierende Passagierpeptid oder/und Passagierpolypeptid kodierenden Nukleinsäureabschnitt, (iii) gegebenenfalls einen für eine Proteaseerkennungsstelle kodierenden Nukleinsäureabschnitt, (iv) einen für einen Transmembranlinker kodierenden Nukleinsäureabschnitt und (v) einen für die Transporterdomäne des AIDA-Proteins aus E.coli oder für eine Variante davon kodierenden Nukleinsäureabschnitt, wobei die Variante eine Homologie von mindestens 80 % zu der Transporterdomäne zumindest im Bereich der β-Faltblattstrukturen hat wobei der Nukleinsäureabschnitt (ii) gegenüber dem für die Transporterdomäne (v) kodierenden Nukleinsäureabschnitt heterolog ist.

Französisch

Procédé selon la revendication 30 caractérisé en ce que des protéines passagères ou des parties de celles-ci sont libérées via une protéase intrinsèque de la cellule-hôte, en particulier la protéase OmpT, la protéase OmpK ou la protéase X. Procédé selon la revendication 31 caractérisé en ce que des protéines passagères ou des parties de celles-ci sont libérées via une protéase amenée par voie externe, en particulier l'IgA protéase, la thrombine ou le facteur X. Vecteur recombinant sur lequel est localisée une séquence d'acide nucléique de fusion en liaison opératoire avec un promoteur, comprenant : (i) un fragment d'acide nucléique codant pour un peptide signal, (ii) un fragment d'acide nucléique codant pour le peptide passager ou/et le polypeptide passager à présenter, (iii) le cas échéant un fragment d'acide nucléique codant pour un site de reconnaissance d'une protéase, (iv) un fragment d'acide nucléique codant pour un lieur transmembranaire et (v) un fragment d'acide nucléique codant pour le domaine transporteur de la protéine AIDA d' E.coli ou d'une variante de celle-ci, ladite variante ayant une homologie d'au moins 80% avec le domaine transporteur au moins dans la région des structures feuillets plissés bêta, le fragment d'acide nucléique (ii) étant hétérologue par rapport au fragment d'acide nucléique codant pour le domaine transporteur (v).

Letzte Aktualisierung: 2014-12-03
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Deutsch

Verfahren zur Präsentation von Peptiden oder/und Polypeptiden auf der Oberfläche von Gram-negativen Wirtsbakterien, wobei man, (a) ein Wirtsbakterium bereitstellt, das transformiert mit einem Vektor, auf dem in operativer Verknüpfung mit einem Promotor eine fusionierte Nukleinsäuresequenz lokalisiert ist, umfassend: (i) einen Signalpeptid-kodierenden Nukleinsäureabschnitt, (ii) einen für das zu präsentierende Passagierpeptid oder/und Passagierpolypeptid kodierenden Nukleinsäureabschnitt, (iii) gegebenenfalls einen für eine Proteaseerkennungsstelle kodierenden Nukleinsäureabschnitt, (iv) einen für einen Transmembranlinker kodierenden Nukleinsäureabschnitt und (v) einen für eine Transporterdomäne eines Autotransporters kodierenden Nukleinsäureabschnitt; und (b) das Wirtsbakterium unter Bedingungen kultiviert, bei denen eine Expression der fusionierten Nukleinsäuresequenz und eine Präsentation des von dem Nukleinsäureabschnitt (ii) kodierten Peptids oder Polypeptids an der Oberfläche des Wirtsbakteriums erfolgt, dadurch gekennzeichnet, daß der Nukleinsäureabschnitt (ii) gegenüber dem für die Transporterdomäne (v) kodierenden Nukleinsäureabschnitt heterolog und das Wirtsbakterium gegenüber dem für die Transporterdomäne (v) kodierenden Nukleinsäureabschnitt homolog ist.

Französisch

Procédé de présentation de peptides ou/et de polypeptides à la surface de bactéries-hôtes gram-négatives, tel que l'on : a) prépare une bactérie-hôte par transformation avec un vecteur sur lequel une séquence d'acide nucléique de fusion est localisée en liaison opératoire avec un promoteur, comprenant : (i) un fragment d'acide nucléique codant pour un peptide signal, (ii) un fragment d'acide nucléique codant pour le peptide passager et/ou le polypeptide passager à présenter, (iii) le cas échéant un fragment d'acide nucléique codant pour un site de reconnaissance d'une protéase, (iv) un fragment d'acide nucléique codant pour un lieur transmembranaire et (v) un fragment d'acide nucléique codant pour un domaine transporteur d'un autotransporteur ; et b) cultive la bactérie-hôte dans des conditions dans lesquelles a lieu une expression de la séquence d'acide nucléique de fusion et une présentation en surface de la bactérie-hôte du peptide ou polypeptide codé par le fragment (ii) d'acide nucléique, caractérisé en ce que : le fragment d'acide nucléique (ii) est hétérologue par rapport au fragment d'acide nucléique codant pour le domaine transporteur (v) et la bactérie-hôte est homologue par rapport au fragment d'acide nucléique codant le domaine transporteur (v).

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