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dmlb
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transfección de adn las células fueron alícuotadas en placas de 24 pocillos que contienen cubreobjetos at 104 células / pocillo y se cultivaron durante la noche a aproximadamente el 80% de confluencia. los plásmidos (0,6 mg) fueron transfectadas en células utilizando lipofectamine plustm reactivo (invitrogen / life technologies , reino unido) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. cuarenta y ocho horas después de la transfección, las células fueron lavadas dos veces con pbs y luego fixed en un 1,85% de formaldehído (sigma) diluido en pbs que contenía 2% de sacarosa (schwarz / mann, ee.uu.) durante 10 minutos a temperatura ambiente. después de tres lavados con pbs, los cubreobjetos fueron removidos del pocillo y se montaron en af1 (citifluor, reino unido). la visualizacion de plásmidos gfp y rfp las células que expresan gfp-fluorescente mhc i y rfp-e5 se visualizaron, ya sea usando un microscopio leica dmlb o un microscopio zeiss lsm 510 .
dna transfection cells were aliquoted into 24-well plates containing coverslips at 104 cells/well and grown overnight to approximately 80% con¯uence. plasmids (0.6 mg) were transfected into cells using lipofectamine plustm reagent (invitrogen/life tech- nologies, uk) according to the manufacturer's instructions. forty-eight hours after transfection, the cells were washed twice with pbs and then ®xed in 1.85% formaldehyde (sigma) diluted in pbs containing 2% sucrose (schwarz/ mann, usa) for 10 min at room temperature. following a further three washes with pbs, the coverslips were removed from the well and mounted in af1 (citi¯uor, uk). visualization of gfp and rfp plasmids cells expressing ¯uorescent gfp-mhc i and rfp-e5 were visualized either using a leica dmlb microscope or a zeiss lsm 510 microscope.