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a variant of a cell-wall degrading enzyme having a beta-helix structure, which variant holds at least one substituent in a position determined by identifying all residues potentially belonging to a stack; characterising the stack as interior or exterior; characterising the stack as polar, hydrophobic or aromatic/heteroaromatic based on the dominating characteristics of the parent or wild-type enzyme stack residues and/or its orientation relative to the beta-helix (interior or exterior); optimising all stack positions of a stack either to hydrophobic aliphatic amino acids, hydrophobic aromatic or polar amino acids by allowing mutations within one or all positions to amino acids belonging to one of these groups; measuring thermostability of the variants by dsc or an application-related assay such as a pad-steam application test; and selecting the stabilized variants. variant of a wild-type parent pectate lyase (ec 4.2.2.2) having the conserved amino acid residues d111, d141 or e141, d145, k165, r194 and r199 when aligned with the pectate lyase comprising the amino acid sequence of seq id no: 2 are preferred.
l'invention concerne un variant d'une enzyme dégradant la paroi cellulaire présentant une structure en hélice bêta, qui maintient au moins un substituant dans une position déterminée par: identification de tous les résidus appartenant potentiellement à une pile; caractérisation de la pile en tant que pile intérieure ou pile extérieure; caractérisation de la pile en tant que pile polaire, pile hydrophobe ou aromatique/hétéro-aromatique sur la base des caractéristiques dominantes des résidus de la pile de l'enzyme parent ou du type sauvage et/ou de son orientation par rapport à l'hélice bêta (intérieure ou extérieure); optimisation de toutes les positions d'une pile soit par rapport aux aminoacides hydrophobes aliphatiques, soit par rapport aux aminoacides hydrophobes aromatiques ou polaires, cela par autorisation des mutations dans une position ou dans toutes les positions par rapport aux aminoacides appartenant à un de ces groupes; mesure de la thermostabilité des variants par dsc ou par une analyse apparentée à l'application telle qu'un essai d'application du type pad-steam; et sélection des variants stabilisés. les variants préférés sont des variants d'une peptate lyase (ec 4.2.2.2) parentale du type sauvage présentant les résidus d'aminoacides conservés d111, d141 ou e141, d145, k165, r194 et r199 lorsqu'ils sont alignés sur la pectate lyase comprenant la séquence d'aminoacides correspondant à seq id no:2.