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el sistema de expresión en células de drosophila que se utilizó, fue el adquirido a invitrogen (carlsbad, ca).
the expression system in drosophila cells that was used was acquired from invitrogen (carlsbad, ca).
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rt-pcr cuantitativa en tiempo real el arn total de células fue aislado de 5 x 10*6 monocitos o macrófagos y 12 x 10*6 neutrófilos utilizando el rneasy minikit 50 de acuerdo a las instrucciones del fabricante (qiagen, valencia ca). dnafree (ambion inc, austin, tx) fue usado para eliminar la contaminación de adn. la transcripción inversa para preparar cdna se realizó con cebadores aleatorios (amersham pharmacia biotech, piscataway, nj) y superscript ii (life technologies, carlsbad, ca). rnaseout (life technologies, carlsbad, ca) fue usado para inhibir la actividad de la ribonucleasa durante las secuencias de reacción. muestras de mrna y cdna fueron cuantificados por las mediciones de espectroscopía uv. el volumen de reacción de pcr fue de 20 microlitros con 6 microlitros de la muestra de cdna, 10 microlitros de 2x taqman universal pcr master mix (pe applied biosystems, foster city, ca), 0,1 microlitros de cada primer (tecnologías de la biosearch, inc., novato, ca), 0.225 microlitros de sonda fluorogénica (biosearch technologies), y 3.575 microlitros de agua libre de adnasa. los oligonucleotidos cebadores para los respectivos tlrs
quantitative real-time rt-pcr total cell rna was isolated from 5 x 10*6 monocytes or macrophages and 12 x 106 neutrophils using the rneasy minikit 50 according to instructions by the manufacturer (qiagen, valencia ca). dnafree (ambion inc, austin, tx) was used to remove contaminating dna. reverse transcription to prepare cdna was performed with random primers (amersham pharmacia biotech, piscataway, nj) and superscript ii (life technologies, carlsbad, ca). rnaseout (life technologies, carlsbad, ca) was used to inhibit ribonuclease activity during reaction sequences. mrna and cdna samples were quantified by uv spectroscopy measurements. the pcr reaction volume was 20 μl containing 6 μl cdna sample, 10 μl 2x taqman universal pcr master mix (pe applied biosystems, foster city, ca), 0.1 μl of each primer (biosearch technologies, inc., novato, ca), 0.225 μl fluorogenic probe (biosearch technologies), and 3.575 μl dnaase free water. the oligonucletoide primers for respective tlrs were
Last Update: 2011-08-24
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