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verfahren nach anspruch 56, wobei ein wachstumsstop oder absterben der milchsäurebakterienzellen veranlasst wird.
procédé selon la revendication 56, dans lequel on provoque l'arrêt de la croissance ou la mort des cellules bactériennes d'acide lactique.
Dernière mise à jour : 2014-12-03
Fréquence d'utilisation : 1
Qualité :
verfahren nach anspruch 44, wobei die erste art von milchsäurebakterienzellen das den nonsense-suppressor codierende gen in dem chromosom enthält.
procédé selon la revendication 44, dans lequel le premier type de cellules bactériennes d'acide lactique contient le gêne codant pour le suppresseur de non-sens dans le chromosome.
Dernière mise à jour : 2014-12-03
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Qualité :
verfahren nach anspruch 48, wobei die erste und zweite art der milchsäurebakterienzellen in einem nahrungsmittelprodukt gezüchtet werden, ausgewählt aus einem milchprodukt, einem pflanzlichen produkt, einem fleischprodukt und einem bäckereibedarfsprodukt.
procédé selon la revendication 48, dans lequel le premier et le second type de cellules bactériennes d'acide lactique sont mises en culture dans un produit alimentaire choisi parmi un produit quotidien, un produit végétal, un produit de boucherie et un produit de boulangerie.
Dernière mise à jour : 2014-12-03
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Qualité :
patentansprüche für folgende vertragsstaaten : es, gr verfahren zur herstellung eines rekombinanten plasmids, das als clonierungsvektor in milchsäurebakterien verwendbar ist, wobei das plasmid in milchsäurebakterien, jedoch nicht in e. coli und b. subtilis replizieren kann, wobei das verfahren im ersten schritt die herstellung eines ersten intermediären plasmids umfaßt, das in milchsäurebakterien, jedoch nicht in e. coli und b. subtilis replizieren kann, wobei die herstellung des intermediären plasmids die folgenden teilschritte umfaßt: (i) isolieren von plasmid-dna aus einem milchsäurebakterium, (ii) hybridisieren von isolierter plasmid-dna aus teilschritt (i) mit einem einen replikationsbereich umfassenden dna-fragment, das aus einem wildtyp-plasmid isoliert wurde, das aus einem milchsäurebakterium isoliert wurde, und dieses wildtyp-plasmid in milchsäurebakterien, e. coli und b. subti lis replizieren kann, (iii) isolieren von plasmid-dna aus teilschritt (i), die nicht mit der wildtyp-plasmid-dna aus teilschritt (ii) hybridisiert, (iv) isolieren eines dna-fragments (a) aus der in teilschritt (iii) erhaltenen plasmid-dna, das einen in milchsäurebakterien, jedoch nicht in e. coli und b. subtilis funktionellen replikationsbereich umfaßt, (v) verbinden des isolierten dna-fragments aus teilschritt (iv) unter ligierungsbedingungen mit einem dna-fragment, das ein erstes selektierbares markergen umfaßt, das die selektion von mindestens e. coli , b. subtilis und milchsäurebakterien erlaubt, die mit einem dieses dna-fragment umfassenden plasmid transformiert sind, zum erhalt des ersten intermediären plasmids, mit dem getestet werden kann, ob der replikationsbereich von dna-fragment (a) in e. coli und b. subtilis nicht funktionell ist, einen zweiten schritt, der das verbinden des ersten intermediären plasmids mit einem ein zweites markergen umfassenden dna-fragment (b) unter ligierungsbedingungen umfaßt, das in milchsäurebakterien, jedoch nicht in e. coli selektierbar ist, wobei die expression des markers die primäre einstufige selektion von milchsäurebakterienzellen erlaubt, die mit einem dieses dna-fragment umfassenden rekombinanten plasmid transformiert sind, und das dna-fragment aus einem wildtyp-plasmid isoliert ist, das aus einem milchsäurebakterium isoliert ist, zum erhalt eines zweiten intermediären plasmids, und einen dritten schritt, der die entfernung des den ersten selektierbaren marker umfassenden dna-fragments aus dem zweiten intermediären plasmid unter für ein restriktionsenzym geeigneten bedingungen umfaßt, und im anschluß daran erneute ligierung, zum erhalt des rekombinanten plasmids, das als clonierungsvektor in milchsäurebakterien verwendbar ist.
revendications pour les etats contractants suivants : es, gr procédé pour la construction d'un plasmide recombinant, utile comme vecteur de clonage dans des bactéries de l'acide lactique, ce plasmide étant capable de réplication dans les bactéries de l'acide lactique mais pas dans e. coli et b. subtilis, le procédé comprenant, à titre de première étape, la construction d'un premier plasmide intermédiaire capable de réplication dans les bactéries de l'acide lactique mais pas dans e. coli et b. subtilis , la construction de ce plasmide intermédiaire comprenant les sous-étapes suivantes : (i) isolement d'adn plasmidique à partir d'une bactérie de l'acide lactique, (ii) hybridation de l'adn plasmidique isolé provenant de la sous-étape (i) avec un fragment d'adn comprenant une région de réplication, ledit fragment d'adn étant isolé à partir d'un plasmide sauvage isolé à partir d'une bactérie de l'acide lactique, ledit plasmide sauvage étant capable de réplication dans les bactéries de l'acide lactique e. coli et b. subtilis , (iii) isolement d'adn plasmidique provenant de la sous-étape (i) qui ne s'hybride pas avec l'adn plasmidique sauvage de la sous-étape (ii), (iv) isolement à partir de l'adn plasmidique provenant de la sous-étape (iii), d'un fragment d'adn (a) comprenant une région de réplication fonctionnelle dans les bactéries de l'acide lactique mais pas dans e. coli et b. subtilis , (v) combinaison dans des conditions de ligature, du fragment d'adn isolé provenant de la sous-étape (iv) avec un fragment d'adn comprenant un premier gène marqueur sélectionnable permettant la sélection d'au moins e. coli et b. substilis et des bactéries de l'acide lactique transformées avec un plasmide comprenant ledit fragment d'adn, pour obtenir le premier plasmide intermédiaire permettant de vérifier que la région de réplication du fragment d'adn (a) n'est pas fonctionnelle dans e. coli et b. subtilis , une seconde étape comprenant la combinaison, dans des conditions de ligature, du premier plasmide intermédiaire avec un fragment d'adn (b) comprenant un second gène marqueur sélectionnable dans les bactéries de l'acide lactique mais pas dans e. coli , l'expression de ce marqueur permettant la sélection primaire en une étape des cellules bactériennes d'acide lactique transformées avec un plasmide recombinant comprenant ledit fragment d'adn, le fragment d'adn étant isolé d'un plasmide sauvage isolé à partir d'une bactérie de l'acide lactique, pour obtenir un second plasmide intermédiaire, et une troisième étape comprenant la délétion, dans des conditions d'enzyme de restriction, à partir du second plasmide intermédiaire, du fragment d'adn comprenant le premier marqueur sélectionnable, suivie d'une religature, pour obtenir le plasmide recombinant utile comme vecteur de clonage dans les bactéries de l'acide lactique.
Dernière mise à jour : 2014-12-03
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