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anticodon
anticodon

procédé de préparation d'un adn renforçant l'expression qui comporte une séquence d'adn capable de former une structure d'arnt en feuille de trèfle après la transcription et qui s'hybride, dans le domaine de l'adn qui forme la boucle de l'anticodon dans la structure en feuille de trèfle après la transcription, avec un oligonucléotide de séquence 5'-gacttagaaggtcgtt-3' ou de séquence (5'-aacgaccttctaagtc-3') complémentaire de la précédente, caractérisé en ce que l'on intègre une banque de gènes constituée par de l'adn chromosomique de e. coli partiellement digéré avec psti dans un vecteur approprié, on cotransfecte des cellules de e. coli avec les vecteurs de la banque de gènes et un plasmide d'expression qui contient un gène recombinant lors de l'expression duquel les cellules de e. coli poussent mal, on cultive dans des conditions de sélection, on isole les clones qui se sont développés en colonies de grande taille, on isole les vecteurs de la banque de gènes à partir de ces clones et on les examine par hybridation avec un oligonucléotide de séquence 5'-gacttagaaggtcgtt-3' ou de séquence (5'-aacgaccttctaagtc-3') complémentaire de la précédente en ce qui concerne la présence de l'adn renforçant l'expression et on isole celui-ci.
verfahren zur herstellung einer expressionsverstärkenden dna, die eine nach transkription zur ausbildung einer t-rna-kleeblattstruktur befähigte dna-sequenz aufweist und in dem bereich der dna, der nach transkription in der kleeblattstruktur die antikodonschleife bildet, mit einem oligonukleotid der sequenz 5'-gacttagaaggtcgtt-3' oder der dazu komplementären sequenz (5'-aacgaccttctaagtc-3') hybridisiert, dadurch gekennzeichnet, daß man eine genbank aus mit psti partiell verdauter chromosomaler e.coli dna in einem geeigneten vektor anlegt, e.coli-zellen mit den genbankvektoren und einem expressionsplasmid, das ein rekombinantes gen enthält, bei dessen expression die e.coli-zellen schlecht wachsen, cotransfiziert, unter selektionsbedingungen kultiviert, klone isoliert, die zu großen kolonien angewachsen sind, aus diesen klonen die genbankvektoren isoliert und durch hybridisierung mit einem oligonukleotid der sequenz 5'-gacttagaaggtcgtt-3' oder der dazu komplementären sequenz (5'-aacgaccttctaagtc-3') auf anwesenheit der expressionsverstärkenden dna untersucht und diese isoliert.